Ассоциация мутационного статуса гена BRAF и клинико-морфологических особенностей меланомы кожи Текст научной статьи по специальности « Клиническая медицина»

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Кит О.И., Водолажский Д.И., Златник Е.Ю., Ефимова И.Ю., Кочуев С.С.

В данном исследовании определена ассоциация между мутационным статусом гена BRAF и клинико-морфологическими особенностями меланомы кожи у пациентов Юга России возрастной группы старше 55 лет. У 35 пациентов Юга России с морфологически подтвержденным диагнозом « меланома кожи » проведено молекулярно-генетическое исследование 15-го экзона гена BRAF методами прямого секвенирования по Сэнгеру и RT-PCR. В результате исследования установлено, что присутствие мутации в гене BRAF достоверно ассоциировано с увеличением толщины опухоли по Бреслоу. Также наблюдалось повышение частоты изъязвления опухоли на 21% у пациентов с активирующими мутациями V600. Частота обнаружения мутаций V600 в гене BRAF в тканях меланомы кожи составила 40%.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Кит О.И., Водолажский Д.И., Златник Е.Ю., Ефимова И.Ю., Кочуев С.С.

Association between braf gene mutation status and clinical-morphological features of cutaneous melanoma

This study >BRAF gene and the clinico-morphological features of melanoma patients in the South of Russia of the age group over 55 years. It was carried out molecular genetic study of exon 15 of the BRAF gene sequencing method of Sanger and by RT-PCR in 35 patients in Southern Russia with morphologically confirmed diagnosis of skin melanoma . The study found that the presence of mutations in the gene BRAF was significantly associated with increasing tumor thickness according to Breslow. We also observed an increase in the frequency of ulceration of the tumor by 21% in patients with an activating V600 mutation. The frequency of detection of V600 mutations in the BRAF gene in tissues of melanoma was 40%.

Текст научной работы на тему «Ассоциация мутационного статуса гена BRAF и клинико-морфологических особенностей меланомы кожи»

нами комбинированное лечение, включающее наряду с системной медикаментозной терапией местное введение препаратов в полость матки и органы малого таза, существенно повышает имп-лантационный потенциал эндометрия за счет устранения или ослабления проявлений фиброза, воспаления.

Наиболее результативным показателем эффективности реабилитационной терапии у пациенток с хроническим эндометритом и бесплодием является наступление беременности. В течение года у 3 из 20 (15%) пациенток контрольной группы беременность наступила на фоне ИИСМ. В основной группе 7 из 25 (28%) пациенток забеременели на фоне 2-го этапа лечения без вспомогательных репродуктивных технологий, а 5 из 25 (20%) пациенток – на фоне ИИСМ по собственному настоянию. То есть беременность в основной группе наступила у 48% пациенток против 15% контрольной группы.

Таким образом, применение комбинированной терапии с локальным введением препаратов в полость матки и органы малого таза у пациенток с хроническим эндометритом и нарушениями репродуктивной функции достоверно повышает эффективность традиционного лечения, обеспечивает стойкий лечебный эффект и позволяет достичь наиболее полного восстановления фер-тильности.

1. Бурлев В. А., Ильясова Н. А., Шишканова О. Л., Серов В. Н. Хронический эндометрит: ангиогенные факторы роста в цервикальной слизи у больных с нарушениями репродуктив-

ной функции на фоне импульсной электротерапии// Проблемы репродукции. – 2014. – № 3. – С. 10-15.

2. Воропаева, С. Д. Этиология, патогенез и антибактериальная терапия воспалительных заболеваний органов малого таза у женщин // Consilium medicum. -2008. -Т. 10. № 1. -С. 25-31.

3. Дубницкая, Л. В. Хронический эндометрит: возможности диагностики и лечения/ Л. В. Дубницкая, Т. А. Назаренко // Consilium medicum. – 2007. – Т. 9. № 6. – С. 25-28.

4. Зароченцева Н. В., Аршакян А. К., Меньшикова Н. С., Титченко Ю. П. Хронический эндометрит: этиология, клиника, диагностика, лечение // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2013. – № 5. – С. 21-27.

5. Краснопольский В. И., Серова О. Ф., Туманова В. А. и др. Влияние инфекций на репродуктивную систему женщин // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2004. – № 5.

6. Сухих, Г. Т. Хронический эндометрит / Г. Т. Сухих, А. В. Шуршалина. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 64 с.

7. Унанян А. Л. Сидорова И. С., Аракелов С. Э., Полонская Л. С. и др. Хронический цервицит и хронический эндометрит: общие аспекты патогенеза и патогенетической терапии // Медицинский совет 2013. – № 4-2. – С. 88-95.

8. Цаллагова Л. В., Кабулова И. В., Золоева И. А. Роль хронического эндометрита в генезе бесплодия // Кубанский научный медицинский вестник. – 2014. – № 4 (146). – С. 131-136.

9. Tanrivcrdi H. A. Is Pipeile biopsy really adequate for diagnosing endometrial disease / H. A. Tanriverdi. A. Baiut, B. D. Gun // Med sci monil. – 2004. Vol 10. № 6. – P. 271-274.

10. Tuckennan E. Markers of endometrial function in women with unexplained recurrent pregnancy loss: a comparison between morphologically normal and retarded endometrium / E. Tuckennan, S. M. Laird // Hum. reprod. -2004. Vol. 12. – P. 2624-2628.

О. И. КИТ, Д. И. ВОДОЛАЖСКИЙ, Е. Ю. ЗЛАТНИК, И. Ю. ЕФИМОВА,

С. С. КОЧУЕВ, Ю. В. ПРЖЕДЕЦКИЙ

АССОЦИАЦИЯ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНА BRAF И КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ

Лаборатория молекулярной онкологии ФБГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава России, Россия, 344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14-я Линия, 63. E-mail: [email protected]

В данном исследовании определена ассоциация между мутационным статусом гена BRAF и клинико-мор-фологическими особенностями меланомы кожи у пациентов Юга России возрастной группы старше 55 лет. У 35 пациентов Юга России с морфологически подтвержденным диагнозом «меланома кожи» проведено молеку-лярно-генетическое исследование 15-го экзона гена BRAF методами прямого секвенирования по Сэнгеру и RT-PCR. В результате исследования установлено, что присутствие мутации в гене BRAF достоверно ассоциировано с увеличением толщины опухоли по Бреслоу. Также наблюдалось повышение частоты изъязвления опухоли на 21% у пациентов с активирующими мутациями V600. Частота обнаружения мутаций V600 в гене BRAF в тканях меланомы кожи составила 40%.

Ключевые слова: меланома кожи, мутации, BRAF.

O. I. KIT, D. I. VODOLAZHSKY, E. Yu. ZLATNIK, I. Yu. EFIMOVA, S. S. KOCHUEV, Yu. V. PRZHDETSKY

ASSOCIATION BETWEEN BRAF GENE MUTATION STATUS AND CLINICAL-MORPHOLOGICAL

FEATURES OF CUTANEOUS MELANOMA

Rostov research institute of oncology, Russia, 344037, Rostov-on-Don, the 14th line, 63. E-mail: [email protected]

This study identified associations between mutation status of the BRAF gene and the clinico-morphological features of melanoma patients in the South of Russia of the age group over 55 years. It was carried out molecular genetic study of exon 15 of the BRAF gene sequencing method of Sanger and by RT-PCR in 35 patients in Southern Russia with morphologically confirmed diagnosis of skin melanoma. The study found that the presence of mutations in the gene BRAF was significantly associated with increasing tumor thickness according to Breslow. We also observed an increase in the frequency of ulceration of the tumor by 21% in patients with an activating V600 mutation. The frequency of detection of V600 mutations in the BRAF gene in tissues of melanoma was 40%.

Key words: melanoma, mutations, BRAF.

Меланома – опасное злокачественное заболевание кожи человека с высоким риском метастазиро-вания. Заболеваемость меланомой составляет менее 2% от общего числа онкозаболеваний: в 2012 г. в мире зарегистрировано 232 130 случаев мелано-мы из 14,1 млн. вновь выявленных онкологических больных. Однако рост заболеваемости меланомой отмечен почти во всех странах мира и за 40 лет составил примерно 5% в год [4]. По прогнозу Всемирной организации здравоохранения, заболеваемость меланомой в мире в течение ближайших 10 лет вырастет на 25%. В России в 2013 г. зарегистрировано 8974 новых случая меланомы при общем числе новых онкозаболеваний 535 887 [2]. С 2008 г. по 2013 г. в России абсолютный прирост числа заболевших меланомой составил 15,9% [2]. Составляя не более 10% от злокачественных новообразований кожи, меланома ответственна за 80% смертей от заболеваний этой группы [4].

В развитие меланомы вовлечены как внешние (ультрафиолетовое облучение), так и внутренние (наследственные) факторы. В молекулярном патогенезе спорадической меланомы основную роль играют онкогены и гены-супрессоры различных сигнальных каскадов. В 75% случаев меланомы кожи наблюдается гиперактивация сигнального пути RAS/RAF/MEK/ERK. Одним из его ключевых факторов – серин-треониновая киназа, кодируемая геном BRAF. Мутации в гене BRAF становятся основополагающими в 40-80% случаев меланомы кожи. На сегодняшний день известно около 40 соматических мутаций в гене BRAF [6]. В 80% случаев выявляется нуклеотидная замена Т1799А в 15-м экзоне BRAF, приводящая к замене валина на глутаминовую кислоту в 600-м кодоне ^600Е) [5]. В 20% случаев мутации кодона-600 представлены заменой V600K, редко встречаются замены V600R/D/M [9].

Оценка ряда морфологических характеристик новообразования имеет существенное значение при определении прогноза и формировании групп риска среди больных меланомой кожи. Отмечается корреляция глубины инвазии опухолей по Кларку, как и их толщины по Бреслоу, с послеоперационной выживаемостью [3]. Ухудшение прогноза у больных меланомой кожи отмечается также при изъязвлении опухоли [8].

В связи с этим большой интерес представляет изучение ассоциации клинико-морфологических особенностей меланомы кожи и мутационного статуса гена BRAF.

Цель настоящего исследования заключалась в определении ассоциаций между мутационным статусом гена BRAF и клинико-морфологически-ми особенностями меланомы кожи у пациентов Юга России возрастной группы старше 55 лет.

Материалы и методы исследования

В исследовании участвовали 35 пациентов Юга России: 22 мужчины и 12 женщин в возрасте старше 55 лет с морфологически подтвержденным диагнозом «меланома кожи». Для молекулярно-генетического исследования использовали 3-мкм. срезы парафиновых блоков (FFPE), содержащие не менее 20% опухолевых клеток. Экстракция ДНК включала стандартную процедуру депарафини-рования в ортоксилоле, лизис в 2%-ноль SDS-бу-фере в присутствии протеиназы K и дополнительную очистку от ингибиторов на колонках «QIAamp® DNA FFPE Tissue Kit» (IQIAGENE», Германия). Для проведения ПЦР концентрацию ДНК норма-лизовывали до величины 2 нг/мкл. Полимераз-ная цепная реакция для 15-го экзона гена BRAF проводилась с использованием пары праймеров: F 5′-TGCTTGCTCTGATAGGAAAATGAGA-3′ и R 5′-AACTCAGCAGCATCTCAGGG-3′. Амплификация

проводилась на программируемом термоцикле-ре «MaxyGene Gradient» («Axygen», США) по программе, включавшей: первичную денатурацию при 95°С – 5 минут и 40 циклов в режиме: денатурация – 95°С – 15 сек., отжиг – 66°С – 15 сек., синтез при 72°С – 20 сек. и заключительная элонгация 72°С -30 мин. Секвенирующая амплификация проводилось по стандартному протоколу для набора «ABI Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kits ver. 3.1» на термоциклере «MaxyGene Gradient» («Axygen», США) по следующей программе: первичная денатурация при 96°С – 1минута и 30 циклов в режиме: денатурация – 96°С – 10 сек., отжиг – 50°С – 5 сек., синтез при 72°С – 4 мин [1]. Прямое секвенирование исследуемых ампликонов по методу Сэнгера проводили с использованием генетического анализатора ABI Prism 3500 («Life Technologies», США).

Скрининг мутаций V600E в гене BRAF в 35 исследуемых препаратах суммарной ДНК опухолей параллельно определяли методом Real-TimePCR (RT-PCR). Для этого были использованы термо-циклер «CFX96 Touch™ Real-Time PCR System» («Bio-Rad», США) и набор реагентов «Real-Time-PCR-BRAF-V600E» («Биолинк», Россия).

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни, точного критерия Фишера и таблиц сопряженности с применением критерия х2 для порогового уровня p 0,05) (табл. 1). Присутствие мутаций в гене BRAF было достоверно ассоциировано с увеличением толщины опухоли по Бреслоу (p 4 мм наблюдалась на 40% чаще, чем в группе wtBRAF. Близко к статистически достоверным отличиям (p=0,07) наблюдалось повышение частоты изъязвления опухоли в группе mtBRAF по сравнению с wtBRAF на 20%.

Клиническими характеристиками, статистически достоверно не связанными с мутацией в гене BRAF,

70 60 50 40 30 20 10 0

Рис. 1. Частота активирующих мутаций (%) У600 в гене BRAF у пациентов Юга России

оказались: наличие метастазов в лимфоузлы, клинические варианты меланомы кожи, уровень инвазии по Кларку и локализация опухоли (р>0,05).

Полученные данные наглядно демонстрируют, что наличие мутации в гене BRAF является прогностически неблагоприятным фактором, однако мутантный статус этого гена является значимым, но не ведущим фактором, предсказывающим исход этого заболевания.

Детекция мутации V600E в гене BRAF в 35 образцах была проведена с использованием двух методов: прямого секвенирования по Сэнгеру и метода аллельной дискриминации RT-PCR. Методом прямого секвенирования мутация V600E была обнаружена у меньшего количества пациентов в отличие от RT-PCR (табл. 2).

Так, методом прямого секвенирования мутация V600E определялась у шести пациентов (17%), а методом RT-PCR – у девяти пациентов (26%). Расхождение в результатах было выявлено в 3 образцах, что составило 33% от общего количества образцов с подтвержденной методом RT-PCR мутацией V600E. Это, очевидно, связано с различной чувствительностью использованных методов при обнаружении соматической мутации V600E. Однако метод секвенирования по Сэнгеру обнаружил и другие варианты активирующих мутаций V600. Так, общее количество пациентов с выявленными мутациями V600 по методу Сэнге-ра составило 28,5%, а методом RT-PCR – 26%.

Поэтому необходимо учесть, что любой набор для обнаружения мажорной мутации V600E не предназначен для детекции других замен в этой точке. Особенно актуальным это становится для группы пациентов старше 55 лет, где частота V600К генотипов увеличивается с возрастом. Для обнаружения «не V600E» мутаций необходимо использовать наборы, определяющие и другие замены в этой точке, либо дополнительно проводить

Ассоциация между клинико-морфологическими особенностями меланомы кожи и мутационным статусом гена BRAF

Определение мутации гена BRAF в тканях опухолей

Молекулярно-генетическое исследование биоптата опухолевой ткани для определения специфической мутации, которая играет роль в злокачественной трансформации клеток.

Генные мутации при меланоме, белок сигнального пути.

BRAF Mutation Testing, BRAF Gene Mutation Test, BRAF Gene Mutation Analysis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат опухолевой ткани в емкости с фиксирующим раствором или парафиновый блок с биоптатом ткани опухоли. Может использоваться как образец первичной опухоли, так и полученный из метастатического очага.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Современные успехи в лечении онкологических заболеваний во многом связаны с обнаружением молекулярных механизмов возникновения и развития злокачественных новообразований, отличающих их от клеток нормальных тканей, и появлением лекарственных препаратов, способных воздействовать на них. Такие лекарства называются таргетными, то есть действующими на определенную "цель" в опухолевой клетке. Они обладают хорошим профилем безопасности, так как, в отличие от стандартной химиотерапии, практически не действуют на нормальные ткани и характеризуются большей эффективностью. Однако назначение таргетных препаратов возможно лишь при обнаружении в опухолевых клетках специфической мишени для их действия. Кроме того, обнаружение в опухолевых клетках определенных генетических аномалий может использоваться как прогностический фактор.

Сравнительно часто патологическим механизмом злокачественной трансформации клеток является нарушение в так называемых сигнальных путях. Сигнальный путь представляет собой цепь, по которой активирующий сигнал от рецептора, располагающегося на поверхности клетки, через несколько внутриклеточных белков передается в ядро. Одним из таких сигнальных путей является МАРК (Mitogen-activated proteinkinase). Внеклеточные сигналы (факторы роста, гормоны), связываясь с рецептором, активируют путь МАРК, что в свою очередь приводит к активации в клеточном ядре генов, ответственных за пролиферацию. Каскад сигнального пути МАРК включает в себя белки четырех семейств: RAS, RAF, MEK и ERK. Семейство RAF представлено тремя белками – ARAF, BRAF и CRAF, – наибольшей активностью из них обладает BRAF. В норме сигнальный путь активируется только через связывание рецептора со специфической молекулой. Однако при возникновении точечных мутаций в генах, кодирующих сигнальные белки, они могут приобретать новые свойства. Так, при определенных мутациях гена BRAF этот белок становится способным активировать сигнальный путь независимо от рецептора и запускать процесс неконтролируемого клеточного деления.

Мутации гена BRAF характерны для меланом кожи (по разным данным, от 30 до 70%), колоректального рака, немелкоклеточного рака легкого (около 3%), а также для папиллярного рака щитовидной железы. Наиболее часто выявляется мутация гена BRAF V600E, вторая по частоте V600K, значительно реже встречаются V600D и V600R. Буквы в обозначении данных мутаций означают замену нормальной аминокислоты (валина) в шестисотом положении белка на другую. После открытия роли мутаций гена BRAF в патогенезе опухолей, в том числе меланомы, были разработаны новые препараты – низкомолекулярные ингибиторы мутированного фермента BRAF. Эли лекарственные средства блокируют патологически активированный сигнальный каскад, который запускается мутацией BRAF V600, и тормозят развитие опухоли. К BRAF-ингибиторам относятся вемурафениб (зелбораф) и дабрафениб.

Материалом для исследования служит ДНК опухолевых клеток. Она может быть выделена из биоптата опухоли, находящегося в парафиновом блоке. Если же на исследование предоставлен образец опухоли в емкости с фиксирующим раствором, из него изготавливаются парафиновые блоки для возможности длительного хранения и использования в последующем для других диагностических тестов.

Для чего используется исследование?

  • Для определения показаний к назначению низкомолекулярных ингибиторов мутированного фермента BRAF.

Когда назначается исследование?

  • Пациентам с неоперабельной или метастатической меланомой (стадии IIIC – IV), а также распространенным немелкоклеточным раком легкого при отсутствии мутации гена EGFR.

Что означают результаты?

Положительный результат – мутация обнаружена. Также указывается вид выявленной мутации.

Отрицательный результат – мутации не обнаружены.

Что может влиять на результат?

Нарушение техники фиксации биопсийного материала, которое может привести к деградации генетического материала и невозможности тестирования.

  • Воздействие BRAF-ингибиторов на опухолевые клетки с отсутствием мутаций в гене данного белка может, наоборот, сопровождаться патологической активацией каскада RAS-RAF-MEK-ERK и провоцировать рост меланомы. Поэтому исключительно важно проводить диагностику мутационного статуса BRAF. BRAF-ингибиторы не должны назначаться в тех случаях, когда мутация не обнаружена или ее статус достоверно неизвестен.

Цитологическое исследование материала, полученного при оперативном вмешательстве

Цитологическое исследование материала, полученного при эндоскопии (бронхоскопия)

Гистологическое исследование биопсийного материала

Гистологическое исследование доброкачественных образований кожи (папилломы, невусы и др.)

Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски

Определение перестройки гена ALK при раке легкого методом ИГХ

Кто назначает исследование?

Литература

Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 1512-1513.

The Basic science of Oncology. Fifth edition. Ian F. Tannock, Robert G. Bristow, Richard P. Hill, Lea Harrington. McGrow-Hill Education, 2013. Pages 173-179.

Программа RUSSCO "Совершенствование молекулярно-генетической диагностики в российской федерации". Практическое руководство для врачей. www.cancergenome.ru

Доклад "Современные возможности таргетной терапии НМРЛ", Имянитов Е. Н. Вестник московского онкологического общества, №11 (602), 2013. С. 3-6.

Онкологическая клиника в Москве

+7(925)191-50-55

Дабрафениб (Dabrafenib) в лечении меланомы

Дабрафениб(Dabrafenib) является новейшим противоопухолевым препаратом из группы ингибиторов BRAF. В настоящее время он весьма успешно используется докторами-онкологами для лечения взрослых пациентов с неоперабельными, запущенными формами меланомы. Как и любое лечебное воздействие, целевая (таргетная) терапия имеет свою сферу применения.

Дабрафениб подходит далеко не всем больным, страдающим метастазирующими и нерезектабельными формами меланомы. Его назначают только тогда, когда развитие меланомной опухоли сопряжено с мутацией V600E, т.е. с заменой валина в позиции 600 на глутаминовую кислоту, а также при мутации V600K гена BRAF.

Вот почему перед началом лечения пациент должен обязательно пройти в специализированной молекулярной лаборатории генетическое тестирование, для которого ему необходимо предоставить парафиновые блоки, содержащие материал, полученный в ходе биопсии или оперативного вмешательства по поводу удаления первичной меланомы либо ее метастатического очага.

Мутировавший ген BRAF, в норме отвечающий за пролиферацию и сохранение клеточных элементов под контролем гормонов и факторов роста, обнаруживают более чем у половины больных с верифицированным диагнозом «меланома кожи». Причем было отмечено, что наиболее часто подобные мутации встречаются при локализации меланомной опухоли на неадаптированной к УФ-излучению коже, т.е. на тех участках кожных покровов, которые обычно закрыты одеждой и не попадают под прямые солнечные лучи.

При поражении данным онкопроцессом слизистых оболочек указанная мутация встречается приблизительно у 5% пациентов, при меланоме глаза аномальный ген BRAF не выделяется. Патологически измененный, мутировавший ген BRAF вследствие своей чрезмерной активности обусловливает неограниченное деление клеток, способствующее росту новообразования. Ингибируя аномальный протеин, дабрафениб прерывает этот процесс, предупреждая тем самым дальнейшее прогрессирование онкозаболевания, улучшая качество и увеличивая продолжительность жизни больного.

Этот препарат не назначают пациентам, не достигшим восемнадцатилетнего возраста. Принимать его следует строго по предписанию врача, ни в коем случае нельзя самостоятельно корректировать его дозировку и прекращать лечение. Если больной забыл принять лекарство, и при этом прошло менее шести часов, ему нужно выпить его как можно скорее. Если же прошло более шести часов, необходимо согласно схеме лечения принять следующую дозу препарата и далее продолжать терапию по расписанию, а не принимать двойную дозу дабрафениба вместо одной пропущенной.

Превышение рекомендованной дозировки чревато развитием побочных эффектов в видеповышения температуры тела, тошноты, рвот, появления изменений на кожных покровах(включая сыпь, локальные уплотнения, формирование новых новообразований), проблем со зрением, головных болей, болей в глазах и т.д. Дабрафениб (син.: Тафинлар) не принято сочетать со всеми прочими методами лечения злокачественной онкопатологии такими, как химио-, радио- и иммунотерапия, однако возможен прием этого лекарственного средства в комбинации с другим препаратом таргетной терапии – траметинибом (Trametinib), ингибирующим тирозинкиназу MEK1/2. Как показывают клинические испытания, именно это сочетание обеспечивает наилучший эффект.

+7(925)191-50-55

г. Москва, Духовской переулок, 22б

Меланома – классификация
Меланома – причины и предрасполагающие факторы
Симптомы меланомы кожи
Программа обследования при меланоме
Ранняя диагностика меланомы: цифровая дерматоскопия и картография всего тела
Диагностика меланомы – анализ мутации гена BRAF
Биопсия сторожевого лимфоузла (операция Sentinel)
Диагностика метастазирующей меланомы: КТ, МРТ, ПЭТ/КТ
Программа лечения меланомы TIL
Таргетная терапия меланомы
Иматиниб (Imatinibum) в лечении меланомы
Дабрафениб (Dabrafenib) в лечении меланомы
Ипилимумаб (Ipilimumab) в лечении меланомы
Кейтруда (Keytruda) в лечении меланомы
Методы хирургического удаления меланомы
Микрографическая хирургия Mohs
Лимфодиссекция при меланоме
Радиотерапия и протонная терапия в лечении меланомы
Фотодинамическая терапия
Химиотерапия в лечении меланомы
Рекомендации после лечения меланомы
Профилактика появления меланомы и озлокачествления невусов
Превентивное удаление подозрительных невусов
Внекожные формы меланомы
Подногтевая меланома
Центр меланомы в Москве

+7(925)191-50-55европейские протоколы лечения в Москве

«Брафтови» плюс «Мектови»: против метастатической BRAF-мутантной меланомы

Новейшая комбинация из ингибиторов BRAF и MEK1/MEK2 получилась, похоже, самой эффективной.

Коротко

  • «Эрей байофарма» (Array BioPharma) заручилась разрешением Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) на новую лекарственную терапию неоперабельной или метастатической меланомы с мутациями BRAF V600E или BRAF V600K. Регулятор одобрил сочетание двух препаратов: «Брафтови» (Braftovi, энкорафениб) и «Мектови» (Mektovi, биниметиниб). Новинка не предназначена для лечения меланомы с геном BRAF дикого типа.
  • Меланома является злокачественным и стремительно прогрессирующим типом рака кожи, развивающимся из меланоцитов — содержащих пигмент меланин клеток, которые, сталкиваясь с неисправленными повреждениями своей ДНК, начинают неконтролируемо размножаться. Обычно меланома поражает кожный покров: у женщин чаще всего страдают ноги, у мужчин — спина. Первопричиной меланомы, справедливой главным образом для светлокожих людей, выступает ультрафиолетовое излучение, получаемое при загаре. В четверти случаев меланома развивается из невусов (родинок). Основной метод лечения меланомы — хирургический.
  • Метастатическая меланома — самый серьезный и жизнеугрожающий тип рака кожи, ассоциированный с низкой выживаемостью. Наиболее распространенные мутации при меланоме затрагивают ген BRAF (до 60% диагнозов), который кодирует белок B-Raf, участвующий в непосредственной сигнализации клеточного роста. Как правило, речь идет о миссенс-мутациях с аминокислотной заменой валина в кодоне 600: в 80–90% случаев BRAF-мутация представлена как V600E (замена валина на глутаминовую кислоту), в 5–12% — V600K (лизин), в 5% и менее — V600R (аргинин) и V600D (аспарагиновую кислоту). Мутации BRAF вызывают активацию сигнального пути MAPK, способствующего пролиферации и улучшенной выживаемости раковых клеток.

Подробности

Энкорафениб (encorafenib) — киназный ингибитор, таргетированный на мутацию V600E гена BRAF, а также BRAF и CRAF дикого типа. Мутации могут вызывать постоянную активацию BRAF-киназ, что стимулирует рост опухолевых клеток.In vitroэнкорафениб также способен связываться с другими киназами, включая JNK1, JNK2, JNK3, LIMK1, LIMK2, MEK4 и STK36.In vitroэнкорафениб ингибирует рост опухолевых клеточных линий, экспрессирующих BRAF-мутации V600E, V600D и V600D. На мышиной модели с имплантированными раковыми клетками, экспрессирующими BRAF V600E, энкорафениб индуцирует регрессию опухоли посредством подавления сигнального пути RAF/MEK/ERK.

Биниметиниб (binimetinib) — обратимый ингибитор киназы митоген-активируемой протеинкиназы типа 1 (MEK1) и типа 2 (MEK2). Эти белки регулируют сигнальный путь киназы, регулируемой внеклеточными сигналами (ERK).In vitroбиниметиниб подавляет фосфорилирование ERK в бесклеточной среде, а также жизнеспособность и MEK-зависимое фосфорилирование BRAF-мутантных клеточных линий меланомы человека.In vivoбиниметиниб ингибирует ERK-фосфорилирование и опухолевый рост ксенотрансплантатов мышей с BRAF-мутациями.

Энкорафениб и биниметиниб таргетированы на две различные киназы в сигнальном пути RAS/RAF/MEK/ERK, также известном как MAPK. Совместное назначение двух препаратов, если сравнивать с каждым из них по отдельности, результирует в повышенной антипролиферативной активности — равно какin vitroна клеточных линиях с BRAF-мутациями, так и мышиных ксенотрансплантатах с меланомой человека BRAF V600E. Кроме того, в последнем случае комбинация энкорафениба и биниметиниба сдерживает появление резистентности к терапии, если сравнивать с моноприменением каждого из лекарств.

Генетическая чувствительность к лекарственным средствам Вемурафениб, Дабрафениб, Траметиниб, Кобиметиниб (определение соматических мутаций в гене BRAF) – раздела Фармакогенетика

Код: AL-B-006

Актуальная панель позволяет определить чувствительность пациента к группе лекарственных препаратов, в основе которых лежит ингибирование RAF-киназ и действие на клетки меланомы человека.

Срок выполнения: до 7 дней

Согласно FDA ответ на некоторые противоопухолевые препараты, воздействующие на клетки меланомы, возможен только при наличии или отсутствии определенных мутаций в гене BRAF. Показания – меланома.

  • Описание исследования
  • Подготовка к исследованию
  • Описание для врача
  • Тип биоматериала

Полиморфизмы

BRAF(Val600Glu; V600E)

Интерпретация результатов по теме теста

Для исследования ДНК используется предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом ткани).

Непригодны для исследований образцы, приготовленные с использованием фиксаторов: Зенкера, Карнуа, Буэна, В-5, а также обработанные кислыми растворами, декальцифицирующими костную ткань.

По возможности образцы, предназначенные для выделения ДНК/РНК, не окрашивать (допустима окраска только крезилвиолетом).

Обращаем внимание, что на результаты исследования ДНК могут повлиять следующие факторы:

  • в случае недостаточного объема пораженной ткани во взятом образце может быть получен ложноотрицательный результат;
  • переливание крови или трансплантация костного мозга, стволовых клеток, органов и тканей, которые проводились в недавнем времени (в данном случае исследование ДНК не рекомендуется проводить в течение, как минимум, 1 месяца после трансплантации или переливания крови);
  • контаминация образца чужим генетическим материалом (все манипуляции с образцами биологического материала рекомендуется проводить в стерильных перчатках)

Актуальная панель позволяет определить чувствительность пациента к группе лекарственных препаратов, в основе которых лежит ингибирование RAF-киназ и действие на клетки меланомы человека.

Согласно FDA ответ на некоторые противоопухолевые препараты, воздействующие на клетки меланомы, возможен только при наличии или отсутствии определенных мутаций в гене BRAF. Наиболее частой активирующей мутацией гена BRAF является точечная нуклеотидная замена c.1799T>A которая соответствует мутации V600E в белке BRAF. При меланоме кожи мутация V600E составляет 80-90% мутаций BRAF. Наличие мутации BRAF V600E при метастатической меланоме кожи является показанием к применению препаратов Вемурафениб и Дабрафениб в США (рекомендации FDA). Траметиниб одобрен для лечения пациентов с распространенной меланомой, опухолевые клетки которых несут мутации V600E или V600K гена BRAF. Кобиметиниб показал наиболее высокую активность в отношении линий опухолевых клеток и опухолей с высокими уровнями фосфорилирования MEK, что часто наблюдается в опухолях с мутациями BRAF.

Для выполнения данного исследования используютсяобразцы ткани, зафиксированные в формалине и заключенные в парафиновый блок

Толщина образца

Оптимальная толщина образца ткани не должна превышать 5 мм

Заливка и фиксация биологического материала

Фиксацию препарата проводить при температуре +4. +10 °С, используя буферный раствор формалина. Процесс фиксации не должен превышать 24 часов (при фиксации ткани в течение 72 часов образуются необратимые сшивки в нуклеиновых кислотах, которые осложняют дальнейшие исследование ДНК/РНК). Соотношение количества формалина к ткани должно быть 10:1. Перед заливкой ткани в парафин нужно убедиться, что образец полностью обезвожен (остаточная вода может вызвать деградацию ДНК/РНК). Для заливки использовать парафин с низкой температурой плавления без примесей.

По возможности образцы, предназначенные для выделения ДНК/РНК, не окрашивать (допустима окраска только крезилвиолетом).

Непригодны для исследований образцы, приготовленные с использованием фиксаторов: Зенкера, Карнуа, Буэна, В-5, а также обработанные кислыми растворами, декальцифицирующими костную ткань.

Маркировка

На этикетке должна быть четко и разборчиво нанесена следующая информация, идентифицирующая образец биологического материала:

фамилия, имя, отчество пациента;

пол и возраст пациента;

индивидуальный штрих-код пациента медицинского учреждения, если таковой имеется

Условия хранения

Парафинизированные образцы хранить в течение года при температуре от 0 до +10 °С (допустимо хранение при температуре +10 до +25°С) в специальном контейнере, предотвращающем попадание влаги и механические повреждения, при условии отсутствия попадания прямых солнечных лучей

Условия транспортировки

Транспортировку БМ следует осуществлять при температуре, соответствующей температуре хранения образца, в специальном контейнере, предотвращающем попадание влаги и механические повреждения, при условии отсутствия попадания прямых солнечных лучей

ВНИМАНИЕ!

Во избежание неопределенного результата генетические исследования не проводятся:

  • после пересадки костного мозга, стволовых клеток, органов и тканей;
  • после процедуры переливания крови в течение 3-х месяцев после проведения процедуры.

dr.Mirokov

Комментарий читателя: